PCR para SARS-CoV-2

El artículo presenta un método de RT-qPCR directo en tiempo real para el diagnóstico de SARS-CoV-2 que evita la extracción tradicional de ARN. En lugar de usar procesos físico-químicos como columnas o reactivos, las muestras de hisopado nasofaríngeo se someten a una inactivación térmica a 70 °C o 95 °C por unos minutos, lo que permite trabajar con la muestra directamente sin afectar la sensibilidad. La amplificación se realiza mediante retrotranscripción seguida de PCR en un termociclador, con ciclos estándar y monitoreo por fluorescencia, sin necesidad de electroforesis. No se mencionan enzimas de restricción ni se extrae ADN; el enfoque es exclusivo para ARN viral, aunque se incluye un control interno humano (gen RNasa P) para verificar la calidad de la muestra. El protocolo no está patentado y se basa en guías del CDC, con 40 ciclos para la detección sensible. Aunque no cuantifica la carga viral para evaluar gravedad, la técnica demuestra resultados comparables a métodos tradicionales con extracción, facilitando diagnósticos rápidos en situaciones con escasez de reactivos. No se usa la prueba para fines legales o forenses.

Extracción del ARN:

Se evitó la extracción tradicional mediante un simple tratamiento térmico que inactiva la muestra y permite el uso directo para amplificación, sin purificación físico-química.

Amplificación:

Se usa RT-qPCR en tiempo real, primero convirtiendo ARN viral en ADNc con transcriptasa inversa (~50 °C), seguido de ciclos térmicos estándar (~95 °C y ~60 °C) para amplificar los genes virales N1/N2 y el control RNasa P, con detección por fluorescencia.

Resultados:

El método directo mostró sensibilidad comparable a técnicas con extracción, detectando eficazmente ARN viral y validando la calidad de la muestra con el control RNasa P, lo que permite un diagnóstico rápido y simplificado de COVID-19.

Imágenes obtenidas de: 

1. https://www.loja.gob.ec/files/noticias/2020/12/ppp.jpg
2. https://www.segurilatam.com/wp-content/uploads/sites/5/2021/12/test-pcr-covid.jpg

Video obtenido de: https://www.youtube.com/watch?v=CxSu61UcQXk

Bibliografía:

1. Bruce EA, Huang M-L, Perchetti GA, Tighe S, Laaguiby P, Hoffman JJ, et al. DIRECT RT-qPCR DETECTION OF SARS-CoV-2 RNA FROM PATIENT NASOPHARYNGEAL SWABS WITHOUT AN RNA EXTRACTION STEP [Internet]. bioRxivorg. 2020. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1101/2020.03.20.001008

Evidencia de búsqueda bibliográfica: