ADN recombinante artificial y en la naturaleza

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

El ADN recombinante en bacterias puede generarse de forma totalmente natural, sin intervención humana, porque depende exclusivamente de su propia maquinaria celular y estrategias evolutivas. Estas bacterias usan sistemas endógenos para intercambiar y reorganizar genes como mecanismo de adaptación y supervivencia. Primero, en la conjugación, transfieren plásmidos a través de pilis tipo IV, integrando operones completos. En la transformación, captan ADN exógeno del ambiente y lo incorporan al cromosoma mediante recombinación homóloga dependiente de RecA. En la transducción, fagos movilizan ADN bacteriano, creando combinaciones genéticas al integrarse en nuevos hospedadores. Todos estos procesos ocurren espontáneamente en ecosistemas naturales. Así, la recombinación natural facilita la evolución sin manipulación artificial (1).

Imagen obtenida de: https://www.nature.com/articles/s41579-021-00650-4

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL

Cloning and expression of human erythropoietin cDNA in Escherichia coli

- Tema: Producción recombinante de eritropoyetina humana para el tratamiento de anemia.
- Objetivo: Clonar y expresar el cDNA de eritropoyetina humana en Escherichia coli para producir eritropoyetina recombinante con potencial uso terapéutico.
- Gen a clonar: cDNA de eritropoyetina humana (~600 pb).
- Enzimas de restricción: Pst I.
- Enzima ligasa: T4 DNA ligasa.
- Vector: pBR322.
- Célula receptora: Escherichia coli (bacteria, procariota).
- Método de inserción del gen: Digestión del vector y del cDNA con Pst I, seguido de ligación con T4 DNA ligasa y transformación en Escherichia coli.
- Método de identificación de clones: Selección de clones por resistencia antibiótica (ampicilina), hibridación de colonias con cDNA marcado (radioactivo), análisis inmunológico con anticuerpos monoclonales contra eritropoyetina y análisis por SDS-PAGE para verificar expresión proteica (2).

Imagen obtenida de: https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRTPyFUcJ5IWbToA0TL4y8a93zh48O37MaL_Q&s

Bibliografía:

1. Arnold BJ, Huang IT, Hanage WP. Transferencia horizontal de genes y evolución adaptativa en bacterias. Nat Rev Microbiol [Internet]. 2022;20(4):206–18. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1038/s41579-021-00650-4
2. Lee-Huang S. Cloning and expression of human erythropoietin cDNA in Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci U S A [Internet]. 1984;81(9):2708–12. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1073/pnas.81.9.2708

Evidencia de búsqueda bibliográfica: